一、關(guān)于特異性的挑選：
特異性的挑選首要需求考慮四個(gè)方面：蛋白特異性、種屬特異性、試驗(yàn)方法特異性、符號(hào)物的特異性。
1、蛋白特異性：
針對(duì)需求檢測(cè)的蛋白查找抗體，幾個(gè)細(xì)節(jié)要區(qū)分，重組表達(dá)的蛋白和內(nèi)源性蛋白的檢測(cè)，對(duì)抗體的要求是不一樣的，注意檢查抗體說(shuō)明書(shū)的檢測(cè)說(shuō)明。假如重組蛋白不是全長(zhǎng)表達(dá)，則需求注意抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi)。內(nèi)源性蛋白能清楚其剪切與潤(rùn)飾的方式，特殊表型的蛋白需求進(jìn)行序列比對(duì)，并結(jié)合抗體免疫原序列，檢查穿插反應(yīng)的狀況。磷酸化蛋白檢測(cè)需求確認(rèn)具體位點(diǎn)，不同位點(diǎn)的磷酸化意味著或許有不同的機(jī)制存在，不宜混為一談。
2、種屬特異性：
同種蛋白不同物種，有著或大或小的差異。目前大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或規(guī)劃多肽抗原的，根據(jù)蛋白的同源性狀況與其他種屬發(fā)生穿插反應(yīng)。需求參照說(shuō)明書(shū)注明的可反應(yīng)種屬信息。一些稀有種屬很難找到抗體，可以經(jīng)過(guò)蛋白的序列比對(duì)，挑選同源序列免疫的抗體，不過(guò)一般這種狀況生產(chǎn)商不會(huì)受理其關(guān)于質(zhì)量的申述，假如可以申請(qǐng)到免費(fèi)的抗體樣品，則利于抗體挑選。。
3、符號(hào)物的特異性
一般基于試驗(yàn)操作的試驗(yàn)方法不會(huì)運(yùn)用帶有符號(hào)的一抗，比方WB、IHC等，都是經(jīng)過(guò)二抗類(lèi)的試劑符號(hào)達(dá)到成果出現(xiàn)的意圖?？墒腔趦x器剖析的一些試驗(yàn)，或許就會(huì)運(yùn)用到直接符號(hào)的一抗，比方流式試驗(yàn)。那么需求了解到自己將要運(yùn)用的儀器能檢測(cè)到的熒光規(guī)模，針對(duì)不通的參數(shù)要求挑選對(duì)應(yīng)的符號(hào)物。在免疫熒光雙標(biāo)試驗(yàn)中，需求選配不同的熒光符號(hào)物。
二、抗體種屬來(lái)歷的挑選：
有人以為單抗比多抗好，其實(shí)這并不是一個(gè)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)挠^(guān)點(diǎn)，只能說(shuō)在或許性上單抗的特異性更好一些，而多抗的親和力會(huì)優(yōu)于單抗，而且特異性并不一定就遜于單抗，首要看抗原的規(guī)劃水平。目前商品化抗體里單抗首要是鼠單抗、兔單抗，多抗首要是兔多抗、山羊多抗等，其他種屬來(lái)歷抗體較少。不主張糾結(jié)于單抗好還是多抗好，能做出試驗(yàn)的抗體便是好抗體。
在挑選上一般主張?jiān)囼?yàn)種屬和抗體種屬親緣性越遠(yuǎn)越好，不宜同源?？贵w不同種屬會(huì)要影響接下來(lái)二抗的選配。特別是在免疫熒光雙標(biāo)試驗(yàn)中，需求在差異于試驗(yàn)種屬的基礎(chǔ)上，區(qū)分開(kāi)兩個(gè)目標(biāo)的抗體種屬來(lái)歷，以便于二抗差異識(shí)別。
三、關(guān)于品牌的挑選：
由于抗體品質(zhì)的異質(zhì)化，關(guān)于抗體的品牌挑選就被我們所注重，可是不管是什么品牌都難免會(huì)遇到不合適自己試驗(yàn)的抗體。所以一般主張考慮那些業(yè)界普遍認(rèn)可、購(gòu)買(mǎi)方便、專(zhuān)業(yè)、售后處理快捷的品牌。一些乃至都沒(méi)有正式代理的，只能備選。一起購(gòu)買(mǎi)時(shí)一定要找可以供給產(chǎn)品指導(dǎo)、試驗(yàn)剖析、售后處理的正規(guī)代理商購(gòu)買(mǎi)，防止由于買(mǎi)到假貨水貨影響試驗(yàn)。
別的不要糾結(jié)于WB過(guò)程中分子量的問(wèn)題。許多時(shí)候，我們看到相同的抗體，不同的品牌，乃至同一品牌不同的貨號(hào)，標(biāo)注的分子量都不一樣。其實(shí)或許只是生產(chǎn)商只檢測(cè)時(shí)運(yùn)用了不同的種屬不同的樣品類(lèi)型，或是參照了不同的文獻(xiàn)，對(duì)運(yùn)用者來(lái)說(shuō)，相同的樣品，不管運(yùn)用哪個(gè)品牌的，只需抗體是對(duì)的，意圖條帶只會(huì)出現(xiàn)在相同的位置。
