一、關(guān)于特異性的挑選:
特異性的挑選首要需求考慮四個方面:蛋白特異性、種屬特異性、試驗方法特異性、符號物的特異性。
1、蛋白特異性:
針對需求檢測的蛋白查找抗體,幾個細節(jié)要區(qū)分,重組表達的蛋白和內(nèi)源性蛋白的檢測,對抗體的要求是不一樣的,注意檢查抗體說明書的檢測說明。假如重組蛋白不是全長表達,則需求注意抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi)。內(nèi)源性蛋白能清楚其剪切與潤飾的方式,特殊表型的蛋白需求進行序列比對,并結(jié)合抗體免疫原序列,檢查穿插反應的狀況。磷酸化蛋白檢測需求確認具體位點,不同位點的磷酸化意味著或許有不同的機制存在,不宜混為一談。
2、種屬特異性:
同種蛋白不同物種,有著或大或小的差異。目前大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或規(guī)劃多肽抗原的,根據(jù)蛋白的同源性狀況與其他種屬發(fā)生穿插反應。需求參照說明書注明的可反應種屬信息。一些稀有種屬很難找到抗體,可以經(jīng)過蛋白的序列比對,挑選同源序列免疫的抗體,不過一般這種狀況生產(chǎn)商不會受理其關(guān)于質(zhì)量的申述,假如可以申請到免費的抗體樣品,則利于抗體挑選。。
3、符號物的特異性
一般基于試驗操作的試驗方法不會運用帶有符號的一抗,比方WB、IHC等,都是經(jīng)過二抗類的試劑符號達到成果出現(xiàn)的意圖??墒腔趦x器剖析的一些試驗,或許就會運用到直接符號的一抗,比方流式試驗。那么需求了解到自己將要運用的儀器能檢測到的熒光規(guī)模,針對不通的參數(shù)要求挑選對應的符號物。在免疫熒光雙標試驗中,需求選配不同的熒光符號物。
二、抗體種屬來歷的挑選:
有人以為單抗比多抗好,其實這并不是一個嚴謹?shù)挠^點,只能說在或許性上單抗的特異性更好一些,而多抗的親和力會優(yōu)于單抗,而且特異性并不一定就遜于單抗,首要看抗原的規(guī)劃水平。目前商品化抗體里單抗首要是鼠單抗、兔單抗,多抗首要是兔多抗、山羊多抗等,其他種屬來歷抗體較少。不主張糾結(jié)于單抗好還是多抗好,能做出試驗的抗體便是好抗體。
在挑選上一般主張試驗種屬和抗體種屬親緣性越遠越好,不宜同源??贵w不同種屬會要影響接下來二抗的選配。特別是在免疫熒光雙標試驗中,需求在差異于試驗種屬的基礎(chǔ)上,區(qū)分開兩個目標的抗體種屬來歷,以便于二抗差異識別。
三、關(guān)于品牌的挑選:
由于抗體品質(zhì)的異質(zhì)化,關(guān)于抗體的品牌挑選就被我們所注重,可是不管是什么品牌都難免會遇到不合適自己試驗的抗體。所以一般主張考慮那些業(yè)界普遍認可、購買方便、專業(yè)、售后處理快捷的品牌。一些乃至都沒有正式代理的,只能備選。一起購買時一定要找可以供給產(chǎn)品指導、試驗剖析、售后處理的正規(guī)代理商購買,防止由于買到假貨水貨影響試驗。
別的不要糾結(jié)于WB過程中分子量的問題。許多時候,我們看到相同的抗體,不同的品牌,乃至同一品牌不同的貨號,標注的分子量都不一樣。其實或許只是生產(chǎn)商只檢測時運用了不同的種屬不同的樣品類型,或是參照了不同的文獻,對運用者來說,相同的樣品,不管運用哪個品牌的,只需抗體是對的,意圖條帶只會出現(xiàn)在相同的位置。