一:運(yùn)用注意事項(xiàng)
1. ELISA檢測(cè)試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可運(yùn)用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2. 濃洗刷液也許會(huì)有結(jié)晶分出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗刷時(shí)不影響效果。
3. 嚴(yán)峻按說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)效果斷定有必要以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
4. 本試劑不一樣批號(hào)組分不得混用。
5. 封板膜只限一次性運(yùn)用,以避免交叉污染。
6. 全部樣品,洗刷液和各種廢棄物都應(yīng)按感染物處理。
7. 底物請(qǐng)避光保存。
二:操作程序
1. ELISA檢測(cè)試劑盒分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl;在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品后稀釋度為5倍)。每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。輕輕晃動(dòng)混勻,37℃溫育60分鐘。
2. 棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次,拍干。
3. 每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
4. 取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
5. 測(cè)定:以空白孔調(diào)零,在450nm波長(zhǎng)下測(cè)量各孔的吸光度值(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
6. 根據(jù)ELISA檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的,其實(shí)際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。