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德國IBL進(jìn)口原裝，酶標(biāo)儀定量檢測

 

中國SFDA注冊：國食藥監(jiān)械（進(jìn)）字2010第3402924號

【產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號】YZB/GEM 1401-2010

 

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：苯丙氨酸檢測試劑盒

商品名稱：苯丙氨酸檢測試劑盒

英文名稱：Phenylalanine （PKU） neonatal Screening Assay

 

【包裝規(guī)格】480人份/盒

 

【預(yù)期用途】

此試劑盒可用于新生兒血斑中L-苯丙氨酸的體外定量檢測。僅供新生兒苯丙酮尿癥的篩查。

苯丙酮尿癥（PKU）,是一種zui常見的氨基酸代謝遺傳病,它通過常染色體隱性遺傳給子代,在人群中的發(fā)病率為1/2600—1/25000。

發(fā)病的主要原因（90—99%病例）是苯丙氨酸羥化酶的活性降低或缺失。苯丙氨酸羥化酶可以使必需氨基酸苯丙氨酸轉(zhuǎn)化為酪氨酸，后者是兒茶酚胺、黑色素和甲狀腺激素的前體，由于苯丙氨酸這個代謝的阻斷，因而通過旁路代謝轉(zhuǎn)化為苯丙酮酸和乙酸鹽，通過腎臟排泄。

    該疾病由于在出生后*周,病人代謝抑制就表現(xiàn)出來。因為蛋白質(zhì)代謝的改變引起大腦神經(jīng)纖維異常的髓鞘形成對疾病的發(fā)展起主要作用。苯丙酮尿癥的其它表現(xiàn)有（和附屬物）色素沉著的缺乏。是因為黑色素形成的紊亂，因而引起皮膚病。

在新生兒中對苯丙酮尿癥的診斷是重要的,因為可通過低苯丙氨酸膳食避免腦損害。因而測定血中苯丙氨酸濃度的篩查試驗，應(yīng)在出生后3—5天進(jìn)行，假如為陽性，應(yīng)通過檢測染色體特異的突變來進(jìn)行確證試驗。

為了檢驗苯丙酮尿癥病人發(fā)展了許多篩查試驗，zui早的試驗是由GUTHRIE 發(fā)明命名的，以枯草桿菌的生長習(xí)性來檢測，枯草桿菌只能在高苯丙氨酸濃度生長。因為該方法的許多缺陷被其它的一些試驗替代，這些實驗是利用病人血液中的苯 丙氨酸參與的化學(xué)反應(yīng)，利用熒光或顯色底物，進(jìn)行測定。也可以應(yīng)用更可信、更靈敏、更的高壓液相色譜檢測。

 

【檢驗原理】

將血斑紙上的苯丙氨酸用3%的三氯乙酸從濾紙上洗脫。

樣本中的苯丙氨酸在外加苯丙氨酸脫氫酶的作用下轉(zhuǎn)化成苯丙酮酸鹽，此反應(yīng)使存在于反應(yīng)混合物中的輔酶NAD+再生。產(chǎn)生的NADH 使加入的黃色Tetrazalium 鹽發(fā)生氧化還原反應(yīng)生成紫色物質(zhì)Formazane，在570nm波長測定OD值，OD值與病人樣本中的苯丙氨酸濃度成正比。

 

【主要組成成分】

 

1）移液器（多道移液器或類似儀器：＜3% CV），體積：25;75;100;600;1000ul。

2）圓底聚苯乙烯試管（12×75mm）

3）試管架

4）試管振蕩器

5）三氯乙酸（3%；w/v），用99.5%的三氯乙酸配得

6）0.5M的NaOH溶液

7）血液采集紙片（建議使用Schleicher & Schuell 903）

8）血斑打孔器，5mm（1/5´´）（例如：Sauer，Hannover，Germany）

9）微孔板（平底）

10）            微孔板振蕩器（300-500rpm，振幅：1.5-3.0mm）

11）            可在570nm讀數(shù)的酶標(biāo)儀（參比波長：690nm）

12）            雙蒸水或去離子水

13）            吸水紙，取樣吸頭和計時器

 

【儲存條件及有效期】

試劑盒應(yīng)當(dāng)儲存于2-8℃的環(huán)境下，避免太陽直射，有效期內(nèi)穩(wěn)定。樣品的儲存與穩(wěn)定及試劑的準(zhǔn)備將在相關(guān)單元中說明。有效期見試劑盒標(biāo)簽。

 

【使用儀器】通用酶標(biāo)儀（配有570nm濾光片）

 

血斑

 

 

 

 

 

 

 

 

 

以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為Y軸（線形）對標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為X軸（對數(shù)）做一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線可用線形回歸曲線來做。用計算機自動計算時，用2點線形 回歸方程得到的曲線。計算回歸曲線時，用每一個標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)值來畫標(biāo)準(zhǔn)曲線（數(shù)值明顯偏離的應(yīng)當(dāng)忽略不要，并使用更接近的數(shù)值來做標(biāo)準(zhǔn)曲線）。樣品的濃 度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上直接讀取。樣品所顯示信號高于zui高標(biāo)準(zhǔn)品的必須用參考方法進(jìn)行確認(rèn)。

轉(zhuǎn)換系數(shù)：1mg/dl=60.5μmol/L

 

典型標(biāo)準(zhǔn)曲線（范例，請勿用其定標(biāo)）

 

如果血斑樣品中苯丙氨酸的濃度高于3.3mg/dl（=平均值+3倍的標(biāo)準(zhǔn)差）的樣品認(rèn)為是“假陽性”樣品，如果苯丙氨酸的期望值呈正態(tài)分布的 話，則3%的受檢人群必須重復(fù)檢測。如果再次檢測的結(jié)果仍高于3.3mg/dl，則應(yīng)當(dāng)再采集新樣品并用證實實驗分析。關(guān)于新生兒篩查的各種團(tuán)體都建 議：TSH的重復(fù)檢測應(yīng)使用不同的臨界值，而且應(yīng)當(dāng)應(yīng)用證實實驗。鑒于每個實驗室都使用不同群體的新生兒樣品，我們強烈建議每個實驗室確定自己實驗室的正 常值范圍，而且其數(shù)值分布應(yīng)當(dāng)與當(dāng)?shù)叵鄳?yīng)社會團(tuán)體的建議數(shù)值一致。實驗結(jié)果本身僅僅是確定治療結(jié)果的一個因素，它必須與臨床癥狀及診斷檢測相結(jié)合。

 

樣品的采集對實驗結(jié)果有明顯的影響，具體如何采集樣品請見“樣品的采集與儲存”。

篩查檢測中，血斑中苯丙氨酸濃度提高的結(jié)果都被認(rèn)為是“假定陽性”樣品，應(yīng)當(dāng)再次取樣并重新檢測。不能*排除實驗中出現(xiàn)假陰性結(jié)果的可能。有 苯丙酮尿癥既往病史或臨床癥候的樣品應(yīng)當(dāng)重復(fù)檢測。如果苯丙酮尿癥的病人接受了藥物治療，那么我們不能排除藥物對苯丙氨酸結(jié)果的直接影響。因此，在上述那 些情況下，如果病人有苯丙酮尿癥的既往病史或臨床征候，我們強烈建議您用證實實驗確定正常的苯丙氨酸值。建議血斑樣品取樣時使用S&S903濾紙 片。如果使用其它的濾紙片，應(yīng)當(dāng)考慮其相應(yīng)的矯正因子。例如，使用2992濾紙片會使結(jié)果產(chǎn)生20%的不同：標(biāo)準(zhǔn)品（2992）=1.2×（S& S903）+0.181；相關(guān)系數(shù)=0.996；數(shù)量=349

至于交叉反應(yīng)，請見“產(chǎn)品性能指標(biāo)”。

如下血液成分濃度高于下述濃度時對實驗結(jié)果會產(chǎn)生明顯影響（±15%）：

 

 

1）      試劑僅供體外診斷和專業(yè)人士使用。

2）      在檢測開始之前，仔細(xì)和完整的閱讀說明書，使用試劑盒提供的說明書的有效版本，確保所有的程序都清楚。尋求更多信息（比如：臨床背景，檢測操作，自動化操作說明，可選擇的軟件，文獻(xiàn)等等），請查看IBL公司主頁。

3）      如果試劑盒有破壞的請與IBL公司或供應(yīng)商以書面方式，但自您拿到試劑盒后zui遲不超過一個星期。在檢測時請不要使用受損的試劑，以確保自身安全。

4）      按照批號和有效期，不要混合使用不同批號的試劑，也不要使用過期的試劑。

5）      遵守實驗室優(yōu)化管理規(guī)則和安全指南，穿實驗服，帶橡皮手套，有必要時請戴護(hù)目鏡。

6）      這種試劑盒中含有會傷害眼睛和皮膚的有害試劑，請閱讀材料來源和標(biāo)簽獲取詳細(xì)信息。產(chǎn)品的材料安全數(shù)據(jù)能夠從IBL公司主頁上下載或直接向IBL公司索取。

7）      根據(jù)國家生物有害物質(zhì)及安全條例，所有化學(xué)藥品和準(zhǔn)備或使用過的試劑都應(yīng)當(dāng)做有害物質(zhì)進(jìn)行處理。

8）      此試劑中用到的標(biāo)準(zhǔn)品及質(zhì)控品的人血成分經(jīng)乙肝表面抗原，抗-HCV抗體，抗-HIV1+2抗體檢驗結(jié)果應(yīng)為陰性，但是試劑中會出現(xiàn)此類病毒 （HIV/II，HbsAg和HCV）或其他具有感染性的病原體的可能性都不能*被排除。因此，所有的試劑在使用和處理的過程中都應(yīng)當(dāng)作潛在生物有害物 質(zhì)進(jìn)行處理。

1）        樣品的不合理處理及實驗操作的任何改動都將影響實驗的結(jié)果。取樣體積、溫育時間、預(yù)處理步驟都必須嚴(yán)格按說明進(jìn)行。只能使用標(biāo)準(zhǔn)取樣器和標(biāo)準(zhǔn)設(shè)備。

2）        一旦實驗開始，所有的步驟都必須完整的進(jìn)行下去，不允許中斷。把所有試劑和樣品都拿到18-25℃的實驗室中，在使用前，輕輕搖動液體試劑和樣品，試劑混合過程中要避免氣泡。

3）        請勿接觸試劑、取樣器、微孔/試管。加試劑和樣本時，請使用新的取樣吸頭，以避免交叉污染。不用的試劑應(yīng)用蓋子蓋好，以免重復(fù)使用。

4）        為了消除潛在的加樣誤差，建議每份樣品都做雙份檢測。

5）        用加液記錄表格核對反應(yīng)板上的排列順序。

6）        溫育時間會影響實驗結(jié)果。微孔加樣的順序和時間都必須一致。建議使用8道移液器向微孔加樣。

 

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