DRG 細小病毒B19 IgM ELISA試劑盒
(德國DRG*,貨號:EIA3504)
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1、說明
DRG公司的吸小病毒B19 IgM酶免試劑盒可用于人血清中抗細小病毒B19 IgM抗體的定性和定量檢測。此試劑盒僅供體外診斷用,在美國,此試劑盒僅供研究用。
2、實驗原理
DRG公司的細小病毒B19 IgM ELISA試劑盒是一種固相的酶聯(lián)免疫吸附實驗,包被板的微孔中包被了重組的細小病毒B19抗原)。將稀釋好的病人樣品和即用型的質(zhì)控品加入到微孔中,溫育期間,陽性樣品和質(zhì)控品中的細小病毒B19特異性抗體會結(jié)合到固相抗原上。洗板除去未結(jié)合的樣品,再微孔中加入辣根過氧酶標記的抗人IgM抗體。在第二次溫育中,IgG酶聯(lián)物會結(jié)合到這些特異性的IgM抗體上而產(chǎn)生酶聯(lián)免疫復合物。第二次洗板除去未結(jié)合的酶聯(lián)免疫復合物。加入TMB底物液后,溶液顯示藍色。之后加入終止液終止酶促反應(yīng),此時容易由藍色變成黃色。溶液所顯示的顏色強度與樣品中細小病毒B19特異性IgM抗體的濃度成反比,450nm處讀取OD值。
3、試劑盒成分
4、樣品
此實驗中將用到血清,不能使用溶血、黃疸血或脂血樣品。
5、實驗步驟
實驗開始前,按照稀釋步驟稀釋好洗滌液,準備好樣品,確定樣品和標準品的數(shù)量。
1孔(如A1孔),用來做空白孔
1孔(如B1孔),用來做陰性質(zhì)控
2孔(如C1+D1),用來做臨界質(zhì)控
1孔(如E1),用來做陽性質(zhì)控
用戶自己決定質(zhì)控品和樣品是否做雙孔。
在C1和D1孔內(nèi)分別加入100ul臨界質(zhì)控
在E1孔內(nèi)加入100ul陽性質(zhì)控
在相應(yīng)的樣品孔內(nèi)分別加入100ul稀釋好的樣品,A1空白孔不用加。
6、實驗的有效性
如果實驗?zāi)軡M足如下標準則認為實驗有效:
空白孔A1:OD值低于0.100
陰性質(zhì)控B2孔:OD值低于0.200
臨界質(zhì)控(CO)C1/D1:OD值在0.250-0.600之間
陽性質(zhì)控E1孔:OD值必須大于臨界質(zhì)控
7、結(jié)果計算
臨界質(zhì)控平均吸光度值(CO)
計算兩個臨界質(zhì)控的平均OD值,如(0.44+0.45)/2=0.445=CO
8、結(jié)果說明
陽性:病人樣品的平均OD值比臨界OD值高20%以上的樣品,(病人樣品OD>1.2倍CO)
灰區(qū):病人樣品的平均OD值在120%CO和90%CO范圍內(nèi)的樣品,(0.9倍CO≤人樣品OD≤1.2倍CO=。將灰區(qū)樣品重新檢測,如果樣品OD仍位于灰區(qū),則樣品為陰性樣品。
陰性:病人樣品的平均OD值比臨界OD值低10%以上的樣品,(人樣品OD<0.9倍CO=。
結(jié)果按DRG單位計算(DU)
病人樣品平均OD值*10/CO=DU(DRG 單位)
例如:1.580*10/0.445=35DU
結(jié)果說明:
臨界值:10DU
灰區(qū):9-12DU
陰性:<9DU
陽性:>12DU
本譯文僅供參考,詳情請以原文為準。
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