按照靜脈穿刺的常規(guī)注意事項采集樣品,血液樣品自采集到實驗時都必須保證其化學完整性。不要使用明顯溶血、黃疸和脂血樣品?;鞚岬臉悠窇斣趯嶒為_始前離心以除去所有的顆粒性物質(zhì)。 | |||
儲存 | 2-8℃ | ≤-20℃ | 避免太陽直射,避免反復凍融。 |
穩(wěn)定性 | 48小時 | >48小時 |
4×2ml | CAL A-D | 標準品A-d:PBS稀釋的人血清,內(nèi)含抗脊髓灰質(zhì)炎病毒IgG抗體,另含0.01%的Methylisothiazolone和0.01%的Bromonitrodioxane,即用。 |
1×14ml | ENZCONJ IgG | 酶聯(lián)物:辣根過氧酶標記的抗人IgG和蛋白緩沖液。另含0.01%的Methylisothiazolone和0.01%的Bromonitrodioxane及5mg/l的ProclinTM,即用。 |
1×12×8 | MTP | 包被板:12條8孔的包被板,包被了脊髓灰質(zhì)炎抗原(純化病毒材料的疫苗,混合有1,2,3型病毒),即用。 |
1×14ml | TMB SUBS | TMB底物液,內(nèi)含TMB,即用。 |
1×14ml | TMB STOP | TMB終止液,0.5M的硫酸,即用。 |
1×60ml | DILBUF | 稀釋緩沖液,PBS/BSA緩沖液,內(nèi)含0.095%的疊氮鈉,即用。 |
1×60ml | WASHBUF CON | 洗滌緩沖液,10倍濃縮,PBS+吐溫20。 |
2× | FOIL | 粘性金屬板,溫育期間用來蓋板用。 |
1× | BAG | 塑料袋,可重新密封,用來儲存不用的板條。 |
稀釋/溶解 | 成分 | | 稀釋劑 | 比例 | 備注 | 儲存 | 穩(wěn)定性 |
60ml | 洗滌液 | 加入540ml | 蒸餾水 | 1:10 | 如果有必要的話,加熱到37℃以溶解所有晶體,混合均勻 | 2-8℃ | 8周 |
樣品 | 稀釋 | 稀釋劑 | 比例 | 備注 |
血清/血漿 | 一般規(guī)律稀釋 | 稀釋緩沖液 | 1:101 | 5ul+500ul |
1 | 給標準品、質(zhì)控品和樣品(雙份檢測)準備足夠的板條,留一孔做空白對照。 |
2 | 將稀釋好的樣品、即用的標準品和質(zhì)控品各100ul分別加入到相應的微孔中,留出空白孔不要加,用來加底物液。 |
3 | 蓋板,室溫溫育60分鐘。 |
4 | 棄取孔內(nèi)反應液,并加入300ul稀釋好的洗滌液,重復洗板3次,棄取孔內(nèi)反應夜后在吸水紙上拍干以除去殘余液體。 |
5 | 在每一微孔中加入100ul即用型的酶聯(lián)物,留出空白孔不要加。 |
6 | 蓋板,室溫溫育30分鐘。 |
7 | 棄取孔內(nèi)反應液,并加入300ul稀釋好的洗滌液,重復洗板3次,棄取孔內(nèi)反應夜后在吸水紙上拍干以除去殘余液體。 |
8 | 在每一微孔中加入100ul即用型的底物液,留出空白孔不要加。 |
9 | 蓋板,室溫避光溫育20分鐘。 |
10 | 在每一微孔中加入100ul即用型的終止液以終止底物反應,空白孔也要加底物液。 |
11 | 充分混合,450nm處讀取OD值,溶液所顯示的顏色60min內(nèi)穩(wěn)定。 |
| OD值 | 矯正后的OD值 | 平均OD值 |
空白孔 | 0.019 | | |
標準品A(陰性質(zhì)控) | 0.112/0.134 | 0.103/0.115 | 0.109 |
標準品B(臨界質(zhì)控) | 0.410/0.472 | 0.391/0.453 | 0.421 |
標準品C(弱陽性質(zhì)控) | 1.069/1.121 | 1.050/1.102 | 1.076 |
標準品D(陽性質(zhì)控) | 2.186/2.220 | 2.167/2.201 | 2.184 |
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