人細胞毒素相關(guān)蛋白A (CagA)檢測試劑盒
(美國DRG進口原裝,貨號:EIA 4138)
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酶聯(lián)檢測人血清或血漿中抗CagA IgG抗體
實驗原理
此試劑盒基于酶聯(lián)免疫法,采用HRP酶聯(lián)物;*次孵育中,樣本中的抗CagA IgG 抗體與包被的CagA 抗原結(jié)合,洗板除去未結(jié)合的,再次孵育,二抗(過氧化物酶標(biāo)記的抗人IgG)與CagA-抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合,再次洗板后,無色的顯色劑(TMB)底物液加入微孔內(nèi),與過氧化物酶反應(yīng)生成了有顏色的復(fù)合物,加入硫酸終止顏色反應(yīng),酶標(biāo)儀450nm和405nm處檢測顏色強度,標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的抗CagA IgG 抗體濃度與顏色強度成正比
試劑盒組成
足夠用于96人份的試劑
試劑盒貯存于2-8℃
各試劑有效期見試劑瓶標(biāo)簽
試劑盒一旦開封,在2-8℃下可保存2個月
實驗所需材料但試劑盒未提供
此實驗還可以用自動酶標(biāo)儀進行操作
樣本采集與準(zhǔn)備
試驗可檢測血清或血漿樣本
適量的脂血樣本不會影響結(jié)果,高含量的脂血或溶血樣本可能會影響試驗,纖維蛋白絲會干擾試驗;確保檢測前樣本是清澈的,樣本在2-8℃下可保存1周,想要保存更長時間建議凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融
使用前:以1:300的比例用先前已稀釋的樣本稀釋液進行樣本稀釋
(如:10 ul 樣本+ 2990 ul的稀釋液)
實驗步驟
試劑和樣本平衡至室溫
使用前來回倒置混勻樣本
注意:標(biāo)準(zhǔn)品不用稀釋
(若采用的是自動酶標(biāo)板設(shè)備,依據(jù)相關(guān)手冊操作)
實驗操作圖
包被孔 | 空白 | 標(biāo)準(zhǔn)品 | 樣本 |
試劑 | |||
標(biāo)準(zhǔn)品 | - | 100 ul | - |
稀釋的樣本 | - | - | 100 ul |
樣本稀釋液 | 100 ul | - | - |
孵育:37±2 ℃,60±5 min | |||
洗板:4 x 350 ul | |||
酶聯(lián)物 | 100 ul | 100 ul | 100 ul |
孵育:37±2 ℃,30±2 min | |||
洗板:4 x 350 ul | |||
顯色劑 | 100 ul | 100 ul | 100 ul |
孵育:37℃,15 min | |||
封閉液 | 100 ul | 100 ul | 100 ul |
讀數(shù):450 nm |
計算示例
以下數(shù)值僅供演示示例,不能用于代替實驗數(shù)值
通過標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣本抗CagA IgG 抗體滴度為70 RU/mL
驗證標(biāo)準(zhǔn)
結(jié)果計算之前,先確保質(zhì)控吸收值在以下期望值范圍內(nèi)
描述 | 期望值 |
陰性質(zhì)控 | <0.100 |
OD 值之比(標(biāo)準(zhǔn)品240 RU/mL/標(biāo)準(zhǔn)品15 RU/mL) | >2.5 |
OD 值之比(標(biāo)準(zhǔn)品15 RU/mL/標(biāo)準(zhǔn)品0 RU/mL) | >3.5 |
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