干貨!酶聯(lián)診斷試劑的工作原理講解
酶聯(lián)診斷試劑在國內(nèi)有許多種叫法,如:ELISA 檢測(cè)試劑盒、 ELISA Kit 、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒、 酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見的叫法是 ELISA 檢測(cè)試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒等。它是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。
酶聯(lián)診斷試劑是酶免疫測(cè)定技術(shù)中應(yīng)用較廣的技術(shù),其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應(yīng)板 ) 表面,使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的酶聯(lián)診斷試劑檢測(cè)方法有雙抗體夾心法和間接法,前者用于檢測(cè)大分子抗原,后者用于測(cè)定特異抗體。
酶聯(lián)診斷試劑的工作原理:
促卵泡素(FSH)是動(dòng)物腦垂體分泌作用于卵巢卵泡生長(zhǎng)、發(fā)育、分化、成熟和排卵的重要繁殖激素。由于是生物大分子,不能透過細(xì)胞膜,F(xiàn)SH必須與靶細(xì)胞膜上的促卵泡素受體(FSHR)結(jié)合,經(jīng)過受體介導(dǎo)將信息傳遞到靶細(xì)胞內(nèi),才能發(fā)揮其生物學(xué)功能。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體,檢測(cè)相抗體也為多克隆抗體,經(jīng)生物素標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng);經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。酶聯(lián)診斷試劑顏色的深淺和樣品中的待測(cè)因子呈正相關(guān)。