ELISA試劑盒具體的操作方法介紹
ELISA試劑盒的特點是可以一同進行許多標本的檢測,并可在特定的比色計上迅速讀出成果?,F(xiàn)在已有多種自動化儀器用于微量反應板型的ELISA檢測,包含加樣、洗刷、保溫、比色等進程,對操作的標準化有重要意義。下面我們來看看關于它的操作方法!
操作過程:
1、確認本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數(shù)目。
2、將倍比稀釋的規(guī)范品各0.1ml順次參加一排7孔中,1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標本按100ul每孔參加。
3、酶標板加上蓋,37℃反響90分鐘。
4、反響后用自動洗板機吸去酶標板內的液體;或甩去酶標板內液體,再對著吸水紙拍幾下,洗刷2次。
5、將準備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml順次參加。37℃反響60分鐘。
6、0.01MTBS或0.01MPBS洗刷3次,每次浸泡1分鐘左右。
7、將準備好的工作液按每孔0.1ml順次參加。37℃反響30分鐘。
8、按每孔0.1ml順次參加TMB顯色工作液,37℃避光反響,反響過程中,要常常的調查,當肉眼可見規(guī)范品的前3-4孔有顯著的梯度藍色,后3-4孔不同不顯著時,即可參加停止液0.1ml/孔。(顯色反響長不要超越30分鐘)。
9、根據(jù)樣品的吸光值在坐標上找出對應的濃度。ELISA試劑盒用戶也能夠使用各種應用軟件來核算。應記住由于樣品稀釋了N倍,其實際濃度應該×N。
注意以下事項:
1.試劑盒應在有效期內;
2.仔細閱讀闡明書;
4.標本制備要規(guī)范,每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備,盡量分裝做備份。短期內無法實驗者,注意低溫保存;
5.依據(jù)檢測標本數(shù)量承認所需試劑的量;
6.準備好全部實驗額定所需物品,如試管、吸頭、移液器、離心機等;按說明書將所用ELISA試劑盒平衡至室溫,制作所需試劑。