鐵調素檢測試劑采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被鐵調素(Hepcidin)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并洗滌。
用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成黃色。顏色的深淺和樣品中的鐵調素(Hepcidin)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
鐵調素是一種在2000年被發(fā)現(xiàn)的由HAMP基因編碼并在肝臟中表達的肽類激素,由于其肝臟表達和抗微生物活性而被稱為“hepcidin”,它控制十二指腸內(nèi)鐵的攝取和巨噬細胞釋放的鐵,并可能參與鐵向不同器官的分布。
鐵調素被認為在阻斷下列血液流入血漿中具有至關重要的作用:十二指腸吸收,巨噬細胞釋放,肝細胞儲存鐵的動員,以及與炎癥貧血有關的一切。在與感染自身免疫性疾病,危重疾病,肥胖和急性心肌梗塞等炎性疾病相關的貧血中也觀察到異常升高的hepcidin水平。
樣品收集、處理及保存方法:
1、血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3、細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5、保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。