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CA72-4檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

中文名稱：CA72-4檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名稱：CA72-4

貨號(hào)：EIA5071

產(chǎn)品規(guī)格：96人份/盒

注冊(cè)證號(hào)：國(guó)械注進(jìn)20163402609

【預(yù)期用途】CA724試劑腫瘤標(biāo)志物酶聯(lián)診斷試劑盒用于在人體血清或血漿中定量檢測(cè)腫瘤相關(guān)抗原CA72-4(TAG-72)，僅供體外診斷使用。

【檢測(cè)原理】

DRG公司的酶免實(shí)驗(yàn)是一種基于夾心法原理的固相酶免吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）。反應(yīng)板上的微檢測(cè)孔包被有能結(jié)合CA72-4分子上*抗原位點(diǎn)的單克隆小鼠抗體。一份含有內(nèi)源性CA72-4的病人樣本在包被孔中與酶聯(lián)物進(jìn)行孵育，該酶聯(lián)物是一種聯(lián)結(jié)有辣根過(guò)氧化物酶的抗CA72-4抗體。孵育后，用洗滌液洗去未結(jié)合的酶聯(lián)物。結(jié)合上的辣根過(guò)氧化物酶的總量與樣本中CA72-4的濃度成正相關(guān)。加入底物溶液后，顯出的顏色強(qiáng)度與病人樣品中CA72-4的濃度成正比。

【主要組成成分】

1.微孔板：12×8孔，可拆，微孔中包被抗CA72-4單克隆抗體。

2.標(biāo)準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品0-4）：5支0.5ml，即用，濃度為0,3，20，50，100U/ml

3.質(zhì)控高&低：2支凍干粉，0.5ml，見(jiàn)“試劑準(zhǔn)備”，質(zhì)控品的濃度及范圍請(qǐng)見(jiàn)試劑瓶標(biāo)簽或質(zhì)控單

4.樣品稀釋液：一支，3ml，即用

5.酶聯(lián)物：1支1.4ml，10倍濃縮，標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶的抗CA72-4抗體

6.酶聯(lián)物稀釋液：一支，14ml

7.底物液：一支14ml，即用

8.終止液：0.5M的硫酸，一支14ml

9.洗滌液（40X）：一支30ml

注意：用于樣品稀釋的樣品稀釋液應(yīng)視需要而定。

實(shí)驗(yàn)需要器材（但試劑盒不提供）

1.酶標(biāo)儀(450±10nm)。

2.移液器

3.吸水紙

4.蒸餾水

5.計(jì)時(shí)器

6.坐標(biāo)紙或是數(shù)據(jù)處理軟件

【儲(chǔ)存條件】

未開(kāi)啟的試劑在2-8℃下儲(chǔ)存，在保質(zhì)期內(nèi)保持其穩(wěn)定性。不要使用過(guò)期的試劑。所有開(kāi)啟了的試劑都應(yīng)在2-8℃下儲(chǔ)存，微孔板需在2-8℃下儲(chǔ)存，一旦打開(kāi)了微孔板的袋子，需小心地將其重新密封。

【樣本要求】

可使用血清或血漿（使用EDTA或肝素抗凝）樣品，不要使用溶血﹑脂血﹑黃疸的樣品。注意：含疊氮鈉的樣品不能用于此實(shí)驗(yàn)。

樣品采集

血清：

靜脈采血，允許使用凝血，在室溫下用離心法分離血清。全血未*凝固前請(qǐng)勿離心，接受了抗凝劑治療的病人血液可能需要更長(zhǎng)的凝血時(shí)間。

血漿：

將全血收集到含有抗凝劑的離心管內(nèi)，收集后馬上用離心法分離。

樣品的儲(chǔ)存

樣品蓋好蓋子后，可在實(shí)驗(yàn)前2-8℃下儲(chǔ)存5天，要更長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存，應(yīng)在-20℃下凍存。在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前應(yīng)避免反復(fù)凍融樣品。

樣品的稀釋

在z初的實(shí)驗(yàn)中，要是樣品的濃度高于z高標(biāo)準(zhǔn)品，則樣品應(yīng)用按實(shí)驗(yàn)步驟所描述的用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋和重新檢測(cè)。在計(jì)算濃度時(shí)需乘以此稀釋系數(shù)。

例子：

1.按1：10稀釋：10ul的血清+90ul的樣品稀釋液（充分搖勻）。

2.按1：100釋?。?0ul稀釋a）稀釋的血清+90ul的樣品釋稀液（充分搖勻）

【檢測(cè)方法】

在使用前將所有的試劑和所需的板條平衡至室溫。

質(zhì)控品

在凍干粉中加入0.5ml的蒸餾水使其復(fù)溶，并至少放置10min，在使用前充分搖勻。復(fù)溶后的質(zhì)控品需在-20℃下儲(chǔ)存。

洗滌液

在30ml濃縮的洗滌液中加入1170ml的蒸餾水，z終洗滌液的容積為1200ml。稀釋后的洗滌液在室溫下兩星期內(nèi)保持穩(wěn)定。

酶聯(lián)物

使用酶聯(lián)物稀釋液按1：10稀釋。配制好的酶聯(lián)物在2-8℃下，一周內(nèi)穩(wěn)定。

如：1.2ml酶聯(lián)物于10.8ml稀釋液配制成z終體積12ml。

檢測(cè)步驟

每次實(shí)驗(yàn)都應(yīng)含有一條標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.將實(shí)驗(yàn)所需數(shù)目的板條固定在板架上。

2.用一次性吸嘴將20ul的標(biāo)準(zhǔn)品﹑質(zhì)控品和樣品加入相應(yīng)的檢測(cè)孔中。

3.每孔加入100ul的新鮮配制的酶聯(lián)物。*混合十秒，在此步驟里，充分搖勻十分重要。

4.在室溫下溫育120分鐘。

5.快速棄去檢測(cè)孔中的內(nèi)含物，每孔用400ul洗滌液洗板五次，在吸水紙上用力拍板以除去殘留的液體。注意：洗板步驟是否正確將直接影響到實(shí)驗(yàn)的靈敏度和準(zhǔn)確性。

6.每孔加入100ul的底物液。

7.在室溫下溫育30分鐘。

8.每孔加入100ul的終止液終止反應(yīng)。

9.在加終止液后十分鐘內(nèi)，室溫下，于450±10nm處讀取吸光率。

【結(jié)果計(jì)算】

1.計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品﹑質(zhì)控品和病人樣品的平均吸光率。

2.以吸光率為Y軸，濃度為X軸，按照從標(biāo)準(zhǔn)品中獲得的平均吸光率和其相對(duì)應(yīng)的濃度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.利用樣品的平均吸光率，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上得出其相應(yīng)的濃度值。

4.自動(dòng)方法：使用立方函數(shù)﹑四參數(shù)模式或雙對(duì)數(shù)的計(jì)算機(jī)程序可得到結(jié)果。

5.樣品的濃度可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上直接獲取。樣品的濃度高于z高標(biāo)準(zhǔn)品的濃度則需進(jìn)一步稀釋。在計(jì)算樣品的濃度的時(shí)候，要乘以稀釋倍數(shù)。

下面是CA72-4ELISA的標(biāo)準(zhǔn)曲線的典型例子。

【注意事項(xiàng)】

1.在使用前所有試劑和樣品均需平衡至室溫，所有試劑要充分混合但不要起泡。

2.一旦實(shí)驗(yàn)開(kāi)始，所有步驟都必須進(jìn)行到底而不能中斷。

3.對(duì)每種試劑﹑標(biāo)準(zhǔn)品和樣品使用一次性的吸嘴，以避免交叉污染。

4.吸光率決定于溫育時(shí)間和溫度，在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前，建議準(zhǔn)備好所有的試劑，將需要檢測(cè)的微孔板固定在板架上，這些步驟保證每次加液步驟所需時(shí)間相同而沒(méi)有中斷。

5.按照一般的規(guī)律，酶反應(yīng)時(shí)間與溫育時(shí)間和溫度成線性比例。