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促紅細(xì)胞生成素酶免檢測試劑盒
（德國IBL  NM56011）

預(yù)期用途
促紅細(xì)胞生成素（EPO）酶免檢測試劑盒用于人血清中EPO的定量檢測，用于體外診斷，還可輔助貧血癥和紅血球增多癥的診斷。隨著重組EPO的出現(xiàn)，它可作為生物治療增加紅細(xì)胞數(shù)量，那么EPO試驗(yàn)就可用于輔助貧血癥病人的預(yù)測和用藥過程的觀察。
 
簡介
EPO是分子量為30000-340000道爾頓的糖蛋白，人EPO是由165個氨基酸組成的多肽，包含有一個O-連接和3個N-連接的糖鏈。重組EPO在免疫試驗(yàn)中是天然蛋白的良好替代品。血清中的EPO水平由蛋白的生成率和清除率決定，90%的EPO由成人腎臟的腎小管細(xì)胞產(chǎn)生，組織氧化中會降低?，F(xiàn)象表明，這些細(xì)胞中用于檢測血氧飽和度的蛋白是一種血紅素基團(tuán)，隨著血漿中的氧分壓的降低，EPO濃度會增加，這也提示我們在正常的細(xì)胞內(nèi)，血清中EPO濃度與紅細(xì)胞量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。

血清中EPO濃度的定量檢測可輔助貧血或紅細(xì)胞增多癥的診斷。再生障礙性貧血，溶血性貧血和貧血都是由于缺鐵導(dǎo)致海拔血清EPO。而繼發(fā)性貧血患者體內(nèi)的EPO水平是由于腎功能衰竭和其他疾病如獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS）引起，這就是zui有可能由于腎臟受損而引起的EPO大量產(chǎn)生的原因。低濃度的EPO可對腎移植排斥反應(yīng)做出早期預(yù)警，還可以用于監(jiān)測艾滋病人使用AZT的治療過程，EPO濃度的增加表明貧血與AZT治療相關(guān)聯(lián)是由于紅細(xì)胞發(fā)育不全或apliasia紅血球增多癥，或原發(fā)性紅細(xì)胞增多癥（紅細(xì)胞量增加）起因于紅細(xì)胞未受到刺激，因此，血紅蛋白的增加引起EPO的減少，導(dǎo)致血清中EPO水平降低。繼發(fā)性紅血球增多癥，也是總紅細(xì)胞數(shù)增加，循環(huán)EPO水平提高的生理反應(yīng)，引起了組織缺氧，缺氧因素可能有肺纖維化，心血管疾病，長期暴露在高海拔地區(qū)，異常形式的血紅蛋白和藥物治療。一些腫瘤也會產(chǎn)生EPO，這種情況下，EPO可作為監(jiān)測有效治療的腫瘤標(biāo)記物。
 
實(shí)驗(yàn)原理
促紅細(xì)胞生成素（EPO）酶免檢測試劑盒采用的是雙位點(diǎn)酶聯(lián)法，檢測具有生物活性的EPO氨基酸鏈，采用看兩種不同的鼠單抗與人EPO特異性結(jié)合。一個是生物標(biāo)記的鼠單抗，另外一個是HRP標(biāo)記鼠單抗。
試驗(yàn)中，標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品或是樣品與酶標(biāo)抗體和生物素標(biāo)記抗體一起在鏈霉親和素包被的微孔板內(nèi)孵育，孵育結(jié)束后，洗去未結(jié)合的成分，再加入TMB底物液孵育，終止液加入終止反應(yīng)，顏色變?yōu)辄S色。黃色強(qiáng)度與樣品中的EPO成正比，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度和OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，質(zhì)控和樣本中的EPO濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取。標(biāo)準(zhǔn)品已經(jīng)WHO EPO標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)證，WHO參考標(biāo)準(zhǔn)品是EPO*標(biāo)準(zhǔn)（87/684）
 
注意事項(xiàng)

1. 僅供體外診斷和研究
2. 實(shí)驗(yàn)前，認(rèn)真閱讀說明書，確保所有操作都已理解
3. 如果試劑盒有破壞的請與IBL公司或是提交您的投訴單，但自您拿到試劑盒后zui遲不超過一個星期。嚴(yán)重破損的成分不能用于實(shí)驗(yàn)，將其保存好直至找到zui終的解決辦法。之后，按照*條例將其處理掉。
4. 確認(rèn)批號和有效期，不要將不同批號的試劑混合，不要使用過期試劑。
5. 具備良好的實(shí)驗(yàn)操作和安全意識，穿戴實(shí)驗(yàn)服，一次性手套和護(hù)目鏡
6. 試劑中含有危險性物質(zhì)，可能會刺激眼睛和皮膚，見“MATERIALS SUPPLIED”和標(biāo)簽。MSDS可在IBL主頁上找到或直接向IBL公司索要
7. 化學(xué)物質(zhì)或是準(zhǔn)備試劑都應(yīng)根據(jù)生化危險和安全法規(guī)來操作
8. 避免接觸終止液，可能會引起皮膚刺激或燒傷
9. 試劑A，洗滌濃縮液，EPO標(biāo)準(zhǔn)液和指控都含有環(huán)丙沙星防腐劑，對喹啉藥物敏感的人避免接觸，女性或孕婦應(yīng)避免接觸環(huán)丙沙星
10. 試劑1，生物素標(biāo)記的EPO抗體含有Proclin300防腐劑，處理時應(yīng)戴手套，如果皮膚接觸到了，應(yīng)立即用中性肥皂和清水清洗，如果眼睛接觸到了，則用水沖洗15min，若吞咽了，避免嘔吐，喝大量水，立即看醫(yī)生
11. 試劑盒中的所有試劑包括檢測過的人血清/血漿對HIV/II，HbsAg和HCV都表現(xiàn)為陰性，但是試劑中會出現(xiàn)此類病毒（HIV/II，HbsAg和HCV）或其他具有感染性的病原體的可能性都不能*被排除。因此，所有的試劑在使用和處理的過程中都應(yīng)當(dāng)作潛在生物有害物質(zhì)進(jìn)行處理。

 
儲存和穩(wěn)定性
應(yīng)在2-8℃下運(yùn)輸，避免高溫或陽光直射。樣品的貯存和穩(wěn)定性以及試劑的準(zhǔn)備都在相關(guān)章節(jié)有介紹。微孔板可保存至有效期，不用的微孔板要立即放置密封袋內(nèi)保存在2-8℃。
 
樣品采集和貯存
血清
需用人血清進(jìn)行，樣品雙份檢測。400ul血清是必要的，我們建議采樣時間在7:3到12:00am，因?yàn)橛形墨I(xiàn)報道稱人的EPO是會不斷變化的。無需加入抗凝劑采集全血，允許全血在2-8℃下凝結(jié)，報道稱，與放免試驗(yàn)中在冰上凝集約30%相比，室溫下凝集會導(dǎo)致EPO值降低。不要將樣品放置在自動除霜冷凍機(jī)內(nèi)，使用前，所有樣品應(yīng)平衡至室溫，混合均勻，避免采用溶血或脂血樣品
貯存條件：2-8℃，24h
         -15℃，12個月
避免高溫或是陽關(guān)直射，避免反復(fù)凍融


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