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寨卡病毒（IgM抗體）酶聯(lián)診斷試劑盒—德國IBL*

【產(chǎn)品名稱】
中文名稱：寨卡病毒IgM檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名稱：Zika virus IgM micro-capture ELISA

【規(guī)格】
96T

【預(yù)期用途】
寨卡病毒IgM抗體酶聯(lián)診斷試劑盒用于人血清或血漿（檸檬酸、肝素）中抗寨卡病毒IgM抗體的定性檢測。

【前言簡介】
寨卡病毒是一種單鏈RNA病毒，屬黃病毒科家族（黃病毒屬）。它于1947年在烏干達(dá)的寨卡森林進(jìn)行黃熱病研究中從一只恒河猴身上*分離出來。自從被發(fā)現(xiàn)后，寨卡病毒被發(fā)現(xiàn)在在非洲和亞洲流行。2007年寨卡病毒被報(bào)道出現(xiàn)在雅浦島、密克羅尼西亞群島上，這意味著寨卡病毒已傳播出非洲和亞洲。自2003年以來，法屬波利尼西亞、新加勒多尼亞、庫克群島、復(fù)活節(jié)島（智利）、薩摩亞和瓦努阿圖等均有寨卡病毒的出現(xiàn)，在2015年初期，它開始蔓延至巴西和美洲的其他國家。

寨卡病毒主要是靠受感染的伊蚊類蚊子叮咬進(jìn)行傳播的，然而一些不太常見的傳播模式如血液傳播、母嬰傳播及性接觸等均有報(bào)道。

寨卡病毒的潛伏期目前還不太清楚，但有可能是幾天。句估計(jì)，大約只有五分之一的寨卡病毒感染者出現(xiàn)的相應(yīng)的體征和癥狀。被寨卡病毒感染后出現(xiàn)的臨床與登革熱和基孔肯雅熱出的臨床表現(xiàn)類似，但是通常比較溫和。zui常見的臨床癥狀為斑丘疹、低燒、關(guān)節(jié)痛、肌痛、頭痛和結(jié)膜炎，少部分會(huì)出現(xiàn)水腫、喉嚨痛咳嗽、嘔吐等。

人類感染的寨卡病毒傳染病通常是溫和的且是自限的。通常在3-7天后氣臨床癥狀會(huì)自行緩解，關(guān)節(jié)痛可能或持續(xù)一個(gè)月。在極少數(shù)的情況下，寨卡病毒感染的吉蘭--巴雷綜合征，可能會(huì)引起周圍神經(jīng)的紊亂。此外在懷孕期間感染寨卡病毒有可能引起胎兒先天性顱腦畸形。

 

主要檢測方法：
1. 細(xì)胞培養(yǎng)分離
2. PCR
3. 血清學(xué)：IF、ELISA
4. 蝕斑減少中和試驗(yàn)（PRNT）

【檢測原理】
寨卡病毒IgM抗體酶聯(lián)診斷試劑盒采用酶聯(lián)免疫法中的μ鏈捕獲法技術(shù)。樣本中的抗體與微孔板包被的抗人IgM抗體結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的部分，然后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的寨卡病毒抗原，該酶聯(lián)物捕獲特異性的IgM抗體，在經(jīng)第二次洗滌除去未結(jié)合的酶聯(lián)物，加入底物液后產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，產(chǎn)物的顏色強(qiáng)度與樣本中IgM抗體的量成正比。隨后加入終止液終止反應(yīng)，并在450/620 nm處讀取吸光度。

【試劑盒組成】
包被板MTP               12×8
包被有抗人IgM抗體。
酶聯(lián)物ENZCONJ          1×15mL
HPR標(biāo)記的寨卡病毒，紅色，黑蓋，即用型
IgM陽性質(zhì)控CONTROL +    1×2mL
人血清或血漿，黃色，紅蓋，即用型
IgM陰性質(zhì)控CONTROL -     1×2mL
人血清或血漿，黃色，藍(lán)蓋，即用型
IgM臨界質(zhì)控CONTROL CO   1×3mL
人血清或血漿，黃色，綠蓋，即用型
樣本稀釋液SAMPLEDIL      1×100mL
磷酸鹽緩沖液（10 mM），pH 7.2 ± 0.2，黃色，白蓋，即用型
洗滌液（20×）WASHBUF CONC   1×50mL
磷酸鹽緩沖液(0.2 M)， pH 7.2 ± 0.2，白蓋
TMB底物液TMB SUBS  1×15mL
黃蓋，即用型
終止液TMB STOP  1×15mL
0.2 mol/L的硫酸，紅蓋，即用型
封板紙  1張

實(shí)驗(yàn)所需材料（未提供）
1. 酶標(biāo)儀
2. 37 °C保溫箱
3. 手動(dòng)或全自動(dòng)洗板設(shè)備
4. 10-1000μL的移液器
5. 漩渦振蕩器
6. 蒸餾水
7. 一次性試管

【儲(chǔ)存及效期】
將寨卡病毒IgM抗體酶聯(lián)診斷試劑盒置于2 - 8 °C條件下。已經(jīng)開啟過的試劑于2 - 8 °C下可保存至標(biāo)簽上的效期。

【樣本要求】
血清、血漿（檸檬酸、肝素）樣本在2 - 8 °C下可保存5天，如要保存更長時(shí)間，則需分裝凍存至-70 - -20°C。使用前解凍并充分混勻。避免反復(fù)凍融。建議不要使用熱滅活樣本。

【檢測方法】
實(shí)驗(yàn)開始前將所有試劑和樣本平衡至室溫。

試劑準(zhǔn)備
洗滌液：用蒸餾水按1:19進(jìn)行稀釋，例如：10mL濃縮洗滌液 + 190mL蒸餾水，充分混勻。配制好的洗滌液在室溫下（2 0- 25 °C）可存放5天。若濃縮液中含有晶體，可放在37 °C條件下使其充分溶解后再進(jìn)行稀釋。

樣本準(zhǔn)備：實(shí)驗(yàn)開始前，所有樣本均按1:100的比例用樣本稀釋液進(jìn)行稀釋。
如：10 μL樣本+1mL的樣本稀釋液，充分混勻。

檢測步驟（詳詢）


結(jié)果判定

 
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
特異性：98.5 %
靈敏度：100 %
局限性：細(xì)菌污染或反復(fù)凍融會(huì)影響樣本的吸光度。

【注意事項(xiàng)】

• 寨卡病毒IgM抗體酶聯(lián)診斷試劑盒僅供體外診斷和專業(yè)人士使用。
• 在檢測開始之前，仔細(xì)和完整的閱讀說明書，使用試劑盒提供的說明書的有效版本，確保所有的程序都清楚。
• 如果試劑盒有破壞的請與IBL公司或是提交您的投訴單，但自您拿到試劑盒后zui遲不超過一個(gè)星期。在檢測時(shí)請不要使用受損的試劑，并妥善保管好以備投訴時(shí)使用。
• 按照批號(hào)和有效期，不要混合使用不同批號(hào)的試劑，也不要使用過期的試劑。
• 遵守實(shí)驗(yàn)室優(yōu)化管理規(guī)則和安全指南，穿實(shí)驗(yàn)服，帶橡皮手套，有必要時(shí)請戴護(hù)目鏡。
• 這種試劑盒中含有會(huì)傷害眼睛和皮膚的有害試劑，請閱讀材料來源和標(biāo)簽獲取詳細(xì)信息。產(chǎn)品的材料安全數(shù)據(jù)能夠從IBL公司主頁上載可直接咨詢IBL公司獲取。
• 根據(jù)國家生物有害物質(zhì)及安全條例，所有化學(xué)藥品和準(zhǔn)備或使用過的試劑都應(yīng)當(dāng)做有害物質(zhì)進(jìn)行處理。
• 避免接觸終止液，以免刺激或灼燒皮膚。
• 試劑盒中部分試劑含有*作為防腐劑，一旦與皮膚或者眼睛發(fā)生接觸，立即用大量清水沖洗. *可能會(huì)與鉛和銅的管道發(fā)生反應(yīng)，形成爆炸性的金屬疊氮化物。當(dāng)處理試劑時(shí)，使用大量水沖洗以防止疊氮化物的形成。
• 試劑盒中的所有試劑包括檢測過的人血清/血漿對HIV/II，HbsAg和HCV都表現(xiàn)為陰性，但是試劑中會(huì)出現(xiàn)此類病毒（HIV/II，HbsAg和HCV）或其他具有感染性的病原體的可能性都不能*被排除。因此，所有的試劑在使用和處理的過程中都應(yīng)當(dāng)作潛在生物有害物質(zhì)進(jìn)行處理。

 
操作注意事項(xiàng)
1. 樣品的不合理處理及實(shí)驗(yàn)操作的任何改動(dòng)都將影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。取樣體積、溫育時(shí)間、預(yù)處理步驟都必須嚴(yán)格按說明進(jìn)行。只能使用標(biāo)準(zhǔn)取樣器和標(biāo)準(zhǔn)設(shè)備。

2. 一旦實(shí)驗(yàn)開始，所有的步驟都必須完整的進(jìn)行下去，不允許中斷。在使用前，將所有試劑和樣品都平衡至室溫（18-25℃），輕輕搖動(dòng)液體試劑和樣品，試劑混合過程中要避免氣泡。

3. 避免污染試劑、取樣器、微孔/試管。加試劑和樣本時(shí)，請使用新的取樣吸頭。不要交換瓶蓋。蓋好不使用的試劑。不要重復(fù)使用微孔/試管或者試劑。

4. 溫育時(shí)間會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。微孔加樣的順序和時(shí)間都必須*。建議使用8孔微量取樣器給微孔加樣。

5. 微孔板的清洗非常重要，微孔清洗不好將會(huì)形成錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。建議使用多孔取樣器或自動(dòng)微孔清洗設(shè)備進(jìn)行清洗。每次溫育間隔期間要避免微孔干燥。加洗滌液和吸液時(shí)要避免碰到微孔。清洗和加試劑時(shí)都應(yīng)特別小心。清洗時(shí)，在微孔中精確的加入洗滌液緩沖液，同時(shí)確保微孔中無殘?jiān)?br />
6. 濕度會(huì)影響微孔板，所以在未到達(dá)室溫時(shí)請勿打開包裝，未使用的微孔板要重新密封于裝有干燥劑的包裝袋中。

 

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