5-羥色胺(serotonin)檢測試劑盒
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:5-羥色胺檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名稱:Serotonin ELISA
【產(chǎn)品規(guī)格】
96T
【預(yù)期用途】
5-羥色胺(serotonin)檢測試劑盒可用于人血清、血漿、血小板和尿液中五羥色胺的體外定量檢測。進(jìn)一步的研究表明:此試劑盒還可用于組織勻漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液的研究
【前言簡介】
五羥色胺是色氨酸代謝的中間產(chǎn)物,它主要存在于腸嗜鉻細(xì)胞、血清素激活的神經(jīng)元和血小板中,它已被確定為是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一種神經(jīng)遞質(zhì)。循環(huán)血液中的五羥色胺幾乎都集中于血小板內(nèi)。循環(huán)五羥色胺濃度的變化可反映出人體的一些病理變化,這些病理變化包括:慢性肌緊張性頭痛、精神分裂癥、高血壓、舞蹈癥、杜氏肌萎癥和早期急性闌尾炎。血清五羥色胺的檢測對類癌綜合征的檢測具有重要臨床意義。人們預(yù)計:在不久的將來,人們對血小板內(nèi)五羥色胺的研究興趣(包括五羥胺的吸收及釋放動力學(xué)研究)應(yīng)該會不斷增長。
【檢測原理】
樣品準(zhǔn)備(將五羥色胺轉(zhuǎn)變?yōu)?/span>N-乙酰五羥色胺)是樣品稀釋的一部分,將每一份樣品分別與?;噭┮黄饻赜涂梢缘玫锦;奈辶u色胺。此實驗采用的是競爭性ELISA的原理,生物素標(biāo)記的和非生物素標(biāo)記的抗原競爭性結(jié)合到一定數(shù)量的抗體結(jié)合位點上。最后,結(jié)合到抗體上的生物素標(biāo)記抗原的量與樣品中被分析物的濃度成反比。當(dāng)反應(yīng)系統(tǒng)達(dá)到平衡后,洗板除去未結(jié)合的生物素標(biāo)記抗原,用抗生物素堿性磷酸酶做標(biāo)記、對硝基苯磷酸做底物來檢測結(jié)合到抗體上的生物素標(biāo)記抗原的量。用已知標(biāo)準(zhǔn)品做一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,將未知樣品的酶活性在標(biāo)準(zhǔn)曲線上進(jìn)行定標(biāo)就可以得到未知樣品中五羥色胺的濃度。
【儲存條件】
試劑盒和運輸環(huán)境和儲存環(huán)境溫度為2-8℃,避免熱源或太陽直射。樣品的儲存與穩(wěn)定性及試劑的準(zhǔn)備將在相關(guān)章節(jié)中闡述。打開了的的試劑盒在有效期內(nèi)穩(wěn)定,前提是要將試劑盒用袋子密封并儲存于2-8℃下。
檢測步驟
簡短操作步驟(僅供樣品A使用,不能應(yīng)用于血漿)
1 | 將標(biāo)準(zhǔn)品、酰化的質(zhì)控品和?;臉悠犯?/span>50µl加入到相應(yīng)的微孔中。 |
2 | 在每一微孔中加入50µl五羥色胺生物素。 |
3 | 在每一微孔中加入50µl五羥色胺抗血清。 |
4 | 蓋板,室溫(18-25℃)下振蕩(500rpm)溫育90min。 |
5 | 移去封板紙,棄取孔內(nèi)反應(yīng)液,每孔用250µl稀釋好的洗滌液洗板3次,吸水紙上拍干以除去殘余液體。 |
6 | 在每一微孔中加入150µl臨時準(zhǔn)備好的酶聯(lián)物。 |
7 | 蓋板,室溫(18-25℃)下振蕩(500rpm)溫育60min。 |
8 | 移去封板紙,棄取孔內(nèi)反應(yīng)液,每孔用250µl稀釋好的洗滌液洗板3次,吸水紙上拍干以除去殘余液體。 |
9 | 如果有條件的話,可以用8道移液器加底物液和終止液。加底物液和終止液時,每孔間的時間間隔應(yīng)當(dāng)相同。使用主動置換型移液器并避免氣泡產(chǎn)生。 |
10 | 在每一微孔中加入200µl臨時配置好的PNPP底物液。 |
11 | 室溫(18-25℃)下振蕩(500rpm)溫育60min。 |
12 | 在每一微孔中加入50µl PNPP終止液以終止底物反應(yīng),輕輕振板以使溶液混合均勻。 |
13 | 加終止液后60min內(nèi)405nm處讀取OD值。 |
可選操作步驟(溫育一整夜,樣品A和樣品B均適用)
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